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PCR一般要经历三十多次循环,为什么?
大家好,我不是权威,我是漫步科研路。
PCR几乎是我们做科研的人天天都要做的事情,跟吃饭睡觉一样频繁。提出这个问题说明你还对PCR不太了解。PCR就是聚合链式反应,而我们进行PCR有很多种用途。根据用途的不一样,循环次数也不一样。当然有一点可以肯定的是循环数越多得到的PCR产物就越多,因为PCR产物的增加是以2的循环数次方增加的。
我来举几个例子,比如你如果要去扩增一个基因做基因克隆,这个时候你需要保证的PCR产物的量一定要大,不然后续的克隆成功率低,这样的话对于表达量还好的基因大概就像你说的30几个循环就够了,但是有些基因表达量太低,这样你的起始模板量太低,你就可能需要跑40个循环。而一些基因起始量很高,可能你只需要扩增20几个循环就够了。
我们也会做定量PCR,这个是最近新冠病毒的核酸检测办法,直接进行荧光PCR扩增就能搞定。而这里的循环数也是根据情况去看。有可能需要40个循环,也有可能只需要20几个循环就搞定了。
所以PCR循环数的选择是根据你起始模板量的多少和你最终需要多少PCR产物量来决定,不是固定的30几个循环。希望我的回答能帮到你,有问题也可以私信我。我们做这个做的太多了。
循环水高密度养殖那些鱼?
低碳高效循环水养殖模式是国内目前较为流行的工厂化养殖模式,具有集约化程度高、水污处理能力强、养殖管理简便、养殖效益好等优点。低碳高效循环水系统利用现代各种循环水设备,包括推水系统、自动投饲机、污水处理系统、增氧设备、水质在线监测设备等;通过循环水处理池进行生物过滤、紫外线杀菌、利用水质在线监测系统,进行水质监测,对达到国家养殖水标准的过滤水重新流进养殖池循环使用,而循环池内的固体作为有机肥料使用;集水循环、水处理、自动投喂和增氧、水质监测于一体,基本实现了“零排放”。
为积极探索宁夏现代渔业发展过程中转型升级的新途径,切实推进渔业生态高效绿色发展,2015年灵武市金河渔业专业合作社引进低碳高效循环水系统,外塘18亩左右,包括5个养殖槽。本试验针对宁夏渔业发展中普遍存在的养殖技术落后,盐碱性池塘水质较差、渔业机械投入少、养殖模式落后陈旧、养殖效益低下、水污染难处理等问题,开展低碳高效循环水养殖模式福瑞鲤适宜密度探索。
一、材料与方法
1.养殖环境及池塘条件
试验点为国家大宗淡水鱼产业技术体系银川综合试验站示范点灵武市金河渔业专业合作社。渔场周围生态环境好、水源充足而且不受污染,水源为黄河水。试验池塘面积20亩左右,水深2.5~3米,淤泥20~50厘米,进排水较方便,交通便利。
2.低碳高效循环水养殖系统
该养殖系统由流水精养区、外塘净化区、操作平台及水污处理区等四个功能区组成,约600米2米左右,即1个推水池、5个养殖槽、1个集粪池,养殖槽规格宽5米、长22米、深2米,全部为钢混结构。外塘中分别在两个塘角(对角)处各安装一个气提式微孔推水增氧机,每台推水增氧机功率为3千瓦,推水池前端并串联结合安装。在每个流水养殖池两侧每隔2米安装一个长为2米的“T”形微孔增氧管,直接放到池底即可。
3.方法
选取示范点低碳高效循环水养殖系统三个养殖水槽开展本试验。为最大程度减小试验误差,三个试验点苗种放养统一定于2017年5月1-2日进行,养殖期间安排专业技术人员统一做养殖记录、打样记录和水质监测,每隔40天打样一次。
4.鱼种放养
鱼种放养前,经过统一的疫病检测及消毒程序后,放入池塘。其中外塘鱼种放养以鲢鳙为主,主要目的是净化水质,有条件的可搭配适量鲇鱼等肉食性鱼类;养殖试验槽放养情况见表1。
5.饲养管理
饲料以配合饲料为主,蛋白质含量30%~34%。每天投喂量占鱼体重的1%~5%,具体依鱼的摄食情况和水质状况而增减。苗种养殖阶段一般每天投喂3~4次,成鱼养殖期间一般每天投喂2~3次,下午投料量略大于上午。平时早、中、晚各巡塘一次,定期加注新水,适时开增氧机。
6.病害防治
一般鲤在饲养过程中不易得病,尤其是在养殖环境优良的环境中,发病率很小。坚持“以防为主,防重于治”的原则,切实做好以下预防措施:①投放苗种前,彻底清理鱼池,严格清塘消毒;②苗种放养时要用1.5%~2.5%食盐等药物浸浴消毒;③苗种体质应健壮,无病害;④投喂新鲜、优质饲料,坚持“四定、四看”的投喂方法;⑤加强水质管理,定期注、换水;⑥定期泼洒漂白粉等消毒水体、食台,定期使用光合细菌、EM菌以及底质改良剂改善水质;⑦发现鱼病及时诊治。
二、结果
截至10月5日,抽查打样及收获情况如下表2所示,本试验期间各试验点未发生较大鱼类病害,养殖情况良好,1号槽和2号槽收获规格均达到1千克/尾以上,2号槽收获密度、收获量和效益预估均为最高,分别为98.98千克/米3、19598千克、49248元;1号槽最低,成活率与产量均达到设计指标。
注:福瑞鲤出塘价格按9月下旬宁夏地区出塘价格计。
三、讨论
福瑞鲤是是宁夏地区在国家大宗淡水鱼产业技术体系的支持下引进的新品种。同其他鲤养殖品种相比,福瑞鲤具有生长快、体型好、饲料转化率高、适应能力强和遗传性状稳定等特点,是农业部“十二五”主推的大宗淡水养殖鱼类新品种。
魁海刚于甘肃永靖县开展了福瑞鲤与建鲤成鱼养殖对比试验,2龄福瑞鲤平均日增重5.32克/天;田永华等于宁夏开展了福瑞鲤池塘养殖试验,三个试验点福瑞鲤苗种与成鱼日增重分别为1.57克/天、6.68克/天。根据本试验养殖结果计算,三个养殖槽福瑞鲤平均日增重为5.55克/天、5.4克/天、4.73克/天,其主要原因应与放养密度有关,日增重与放养密度成反比。三个养殖槽经济效益对比显示,2号槽收获密度、收获量及效益预估等三个指标最高,1号槽最低。从以上分析可以看出,宁夏地区低碳高效循环水福瑞鲤高产高效养殖,养殖密度应控制在20千克/米3左右。因此在当前养殖成本升高,水资源不足的形势下,在宁夏地区推广低碳高效循环水养殖模式,可有效加强渔业机械化、信息化程度,有力推动宁夏现代渔业健康、高效、可持续发展。
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